親和層析空柱是專為抗體、重組蛋白和其他生物大分子純化、脫鹽、濃縮而設(shè)計的。公司提供1ml和5ml兩種規(guī)格的中壓層析空柱，客戶可根據(jù)樣本特性，靈活地選用合適的柱管及其相關(guān)填料介質(zhì)(包括離子交換、免疫親和、分子篩和反相等類型)。
 

　　親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析空柱上樣時應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件，包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強度、溫度等，以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。

 

　　一般生物大分子和配體之間達(dá)到平衡的速度很慢，所以樣品液的濃度不易過高，上樣時流速應(yīng)比較慢，以保證樣品和親和吸附劑有充分的接觸時間進(jìn)行吸附。
 

　　特別是當(dāng)配體和待分離的生物大分子的親和力比較小或樣品濃度較高、雜質(zhì)較多時，可以在上樣后停止流動，讓樣品在層析柱中反應(yīng)一段時間，或者將上樣后流出液進(jìn)行二次上樣，以增加吸附量。樣品緩沖液的選擇也是要使待分離的生物大分子與配體有較強的親和力。另外樣品緩沖液中一般有一定的的離子強度，以減小基質(zhì)、配體與樣品其它組分之間的非特異性吸附。
 

　　生物分子間的親和力是受溫度影響的，通常親和力隨溫度的升高而下降。所以在上樣時可以選擇適當(dāng)較低的溫度，使待分離的物質(zhì)與配體有較大的親和力，能夠充分的結(jié)合;而在后面的洗脫過程可以選擇適當(dāng)較高的溫度，使待分離的物質(zhì)與配體的親和力下降，以便于將待分離的物質(zhì)從配體上洗脫下來。
 

　　上樣后用平衡洗脫液洗去未吸附在親和吸附劑上的雜質(zhì)。平衡緩沖液的流速可以快一些，但如果待分離物質(zhì)與配體結(jié)合較弱，平衡緩沖液的流速還是較慢為宜。
 

　　如果存在較強的非特異性吸附，可以用適當(dāng)較高離子強度的平衡緩沖液進(jìn)行洗滌，但應(yīng)注意平衡緩沖液不應(yīng)對待分離物質(zhì)與配體的結(jié)合有明顯影響，以免將待分離物質(zhì)同時洗下。
 

　　以上內(nèi)容便是本次為大家分享關(guān)于親和層析空柱如何上樣的相關(guān)信息，希望大家在看完之后能夠有所收獲，讓我們下次再見吧。